印度胶树(Ficus elasticaRoxb)属于桑科(Morace-ae)榕属(Ficus)植物。茎、叶柄、叶片肥厚,多乳汁,对于这种特殊类型的材料,如果按照常规的方法制片,在取材、抽气和染色等过程中,常出现抽气不干净和染色不均匀及乳汁脱不掉等现象,影响观察效果。针对上述问题及多年制片的经验,作了一些操作步骤的改进,效果明显得到改善。

    1　磁力搅拌器的作用与脱汁

    为了减少材料的乳汁粘液,首先将外植体剪下的材料,用清水简单冲洗干净,用锋利刀片切取2cm长,快速放入盛有250mL清水的烧杯中(减少导管中进入空气,为后面抽气带来有利条件)。把烧杯口盖上大眼的网纱用橡皮筋扎紧(以材料在冲水时不易跑出来为宜),直接放入水龙头下进行活水清洗,使材料在水中滚动起来,这样可使植物体内部乳汁有部分溢出。如果茎过粗,可从中心纵切一刀,分成2半,这也是减少乳汁的有效溢出的方法之一, 1h后再将材料放入另一个盛有250~500mL清水的烧杯中,用药勺穿透一块10×20cm的纱布,架在烧杯杯口处,可看到清水透明光亮,再用电热磁力搅拌器进行慢速搅拌20min后,很快发现清水变成了浑浊,呈乳白色,用手触摸纱布,明显地看到乳液吸附在上面。这时可将浑浊水倒掉再换一次清水继续搅拌3~5min,提高材料中乳液的溢出率。在后面几个环节中,还会增加材料中乳汁不断溢出,即可看到材料中乳汁明显地减少,为后面的实验操作即染色减少了阻力,使后期制作带来较理想的观察效果。

    2　抽气方法的改进

    在没有真空泵抽气的情况下,以往将材料放入一定量的固定液,用50mL注射器进行手工抽气,时间10~30min不等,结果材料中还有抽不净的空气和粘液,给人工操作带来了一定的难度。改用100mL三角瓶(锥形瓶),将印度胶树的材料放入三角瓶中,加入60~70mL的固定液,盖严胶皮塞(不可漏气),并用100mL注射器穿过胶皮塞进行抽气, 3~5min后材料明显下沉,气泡明显减少,而且看到乳汁不断有溢出的现象。这种固定和抽气方式具有抽气干净彻底,省时高效,安全可靠,提高材料清晰等特点。同时也克服了因材料大、乳汁多,脱水染色和空气难抽净等困难,达到使用真空泵抽气的理想效果。

    3　小型震荡机协助加快脱水渗透等作用

    根据印度胶树茎、叶肥厚,具粘液等特点,材料着色时间慢。为了达到镜检的理想效果,需在脱水剂15%的酒精水溶液中加入一定量的固体蕃红染料(浓度比例根据材料大小老嫩来决定),材料就从15%酒精脱水染色开始,时间视材料性质、大小而定,直到脱水染色溶液渗透到材料的组织中(由于本实验材料大而厚,可染几个小时不等),甚至更长时间。为了加快染色渗透速度,减少操作时间,采用小型震荡机协助加快震荡渗透,方法是将材料放进每一个带盖的塑料瓶中,用橡皮筋将塑料瓶捆扎在一起,固定在震荡机上,慢速震荡,使整体脱水染色过程速率提高,其染色脱水效果彻底、均匀、理想,给下一步操作及观察带来方便。